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酶聯(lián)法檢測(cè)人類免疫缺陷病毒
[測(cè)定方法] ELISA法
[方法學(xué)原理] 在微孔板上預(yù)包被高純度基因重組HIV（1型十Ⅱ型），與樣品中抗HIV抗體反應(yīng)，同時(shí)加入HRP標(biāo)記HIV（1型+Ⅱ型）抗原。然后用TMB底物作用顯色。通過(guò)酶標(biāo)儀檢測(cè)吸光度（OD值）從而判定樣品中HIV抗體的存在與否。
[標(biāo)本準(zhǔn)備] 靜脈抽血2ml，不抗凝
[試劑]
1．預(yù)包被微孔反應(yīng)板條
2．酶標(biāo)試劑
3．陰性對(duì)照
4．陽(yáng)性對(duì)照
5．洗滌液
6．顯色劑A、B
[儀器設(shè)備] 酶標(biāo)儀或全自動(dòng)酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀。
[測(cè)定步驟]
1．將樣品對(duì)應(yīng)微孔按序編號(hào)，每板應(yīng)設(shè)陰性對(duì)照3孔，陽(yáng)性對(duì)照2孔，空白1孔。
2．每孔加人酶標(biāo)試劑100~1，空白孔除外。
3．分別在相應(yīng)孔中加入待測(cè)樣品或陰性對(duì)照、陽(yáng)性對(duì)照20ul，振蕩混勻。37℃環(huán)境中溫育60min。
4．棄去孔內(nèi)液體，用洗滌液充分洗滌6遍，zui后一次盡量拍干。
5．每孔加人顯色劑A、B液各50u1，輕輕振蕩混勻，置37℃環(huán)境中避光顯色10min。
6．每孔加終止液50gl，輕輕振蕩混勻，設(shè)定酶標(biāo)儀波長(zhǎng)450nm（建議用雙波長(zhǎng)檢測(cè)）測(cè)定各孔吸光度。
7．結(jié)果判定 樣品OD值≥臨界值（cut off）者為HIV抗體初篩陽(yáng)性（注意：初篩陽(yáng)性標(biāo)本應(yīng)重新取樣品進(jìn)行雙孔復(fù)試，復(fù)試陽(yáng)性者應(yīng)按“全國(guó)HIV檢測(cè)管理規(guī)范”送HIV確認(rèn)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行確認(rèn)試驗(yàn)）。樣品OD值<臨界值（cutoff）者為HIV抗體陰性。
[注意事項(xiàng)]
1．檢測(cè)單位必須是經(jīng)當(dāng)?shù)匦l(wèi)生行政部門(mén)批準(zhǔn)的HIV初篩實(shí)驗(yàn)室。
2．檢測(cè)必須符合HIV實(shí)驗(yàn)室管理規(guī)范和生物安全守則的規(guī)定，嚴(yán)格防止交叉污染。操作時(shí)必須戴手套、穿工作服，嚴(yán)格健全地執(zhí)行消毒隔離制度。所有樣品、洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理，終止液為2mol／L硫酸，使用時(shí)必須注意安全。
3．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出同時(shí)應(yīng)置室溫環(huán)境中平衡30min后方可使用，未用完的微孔條密封保存。
4．加液時(shí)必須用加液器，并經(jīng)常校對(duì)加液器的準(zhǔn)確性。
5．洗滌時(shí)各孔均需加滿洗滌液，防止孔內(nèi)有游離酶不能洗凈。使用洗板機(jī)洗滌應(yīng)設(shè)定30～60s浸泡時(shí)間。
6．HIV抗體檢測(cè)結(jié)果的判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)，建議用雙波長(zhǎng)450／630nm檢測(cè)。
7．操作應(yīng)按說(shuō)明書(shū)嚴(yán)格進(jìn)行，不同批次試劑不得混用。
[臨床意義] ELISA法HIVI型+Ⅱ型抗體陽(yáng)性提示可能為HIV感染，但須經(jīng)有關(guān)部門(mén)確認(rèn)并須結(jié)合流行病學(xué)史和現(xiàn)病史診斷，同時(shí)送有國(guó)家認(rèn)可資格的確認(rèn)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行確認(rèn)。